差示扫描荧光法（Differential Scanning Fluorimetry，DSF），又称热转移分析（Thermal Shift Assay, TSA），是一种用于评估蛋白质热稳定性与构象变化的快速检测技术。DSF 通过升温过程中监测荧光信号变化，获得蛋白的熔解温度 Tm 及稳定性变化趋势，可用于筛选缓冲体系、优化蛋白保存条件、评估蛋白批次一致性，并辅助判断配体结合引起的稳定性变化（ΔTm）。该方法具有样本消耗低、操作便捷、检测效率高等优势，广泛应用于蛋白制备质量评估、小分子筛选、结构研究前期条件优化及工艺开发等场景，为后续功能实验与互作研究提供可靠的稳定性依据。
• 实验流程简单
• 单次运行周期短
• 适合快速筛选
• 结果当天可出
• 蛋白用量需求低
• 适配微量体系
• 成本投入更低
• 尤其适合珍贵样品
• 上样即可检测
• 无需复杂处理
• 条件优化门槛低
• 重复性更好控制
• 直接测定 Tm 值
• 反映蛋白稳定性
• 对比不同条件差异
• 优化缓冲更直观
• 多缓冲体系并行
• 添加剂快速评估
• pH/盐浓度一键比较
• 快速锁定最优条件
• 蛋白构象稳定性分析
• 配体结合热稳定变化
• 抗体/酶类表征
• 可用于配方与工艺优化
这种方法主要能解决什么问题？适合用在什么阶段？
它最常用于快速评估蛋白稳定性，帮助客户判断蛋白是否“状态良好、适合做下游实验”。在研发早期或蛋白工艺优化阶段，DSF 可以用来筛选更合适的缓冲体系、盐浓度、pH、添加剂条件，也能用于对比不同构建、不同批次蛋白的质量差异。对于结构研究、冻存运输、长期保存等需求，DSF 也是非常高效的前置筛查工具。
结果重复性怎么样？不同批次会差很多吗？
整体重复性通常较好，但前提是样本状态稳定、操作条件一致。影响重复性的常见因素包括蛋白浓度误差、缓冲体系差异、样本冻融次数、以及微量杂质或聚集比例变化等。我们一般会通过标准化上样方式、统一缓冲体系和设置重复孔来提高数据一致性，帮助客户更可靠地比较不同批次或不同构建之间的稳定性差异。
蛋白加了配体之后 Tm 没变化，是不是说明不结合？
不一定。Tm 不变可能代表配体确实不结合，但也可能是“结合存在、但热稳定性变化很小”，或者配体结合位点不影响整体解折叠过程。还有一种情况是配体溶解度或浓度不足，导致实际结合比例不够高。一般建议把 DSF 作为“筛选和趋势判断”的方法，如果项目需要给出明确的结合结论，通常会建议再用 MST、SPR/BLI 等互作技术做进一步确认。
能用来判断配体是否与蛋白结合吗？
可以。很多情况下，配体结合会改变蛋白的稳定性，从而导致 Tm 发生变化（ΔTm）。因此 DSF 常用于小分子筛选、片段筛选或初步结合验证，尤其适合做快速对比和条件探索。不过需要注意的是，并不是所有结合都会带来明显 Tm 变化，因此 DSF 更适合作为“筛选/趋势判断工具”，关键项目通常建议与 MST、SPR/BLI 等结合类方法联用做进一步确认。
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