哺乳动物细胞瞬时表达服务
哺乳动物细胞表达系统具备最完善的蛋白折叠与翻译后修饰能力,能够高度还原蛋白的天然结构与生物学功能,是高端重组蛋白制备的关键平台。该系统可实现精准糖基化、正确二硫键形成及复杂构象装配,尤其适用于抗体、受体、细胞因子及其他对结构和活性要求极高的蛋白。 艾普蒂依托成熟的细胞培养与质量控制体系,哺乳细胞表达在蛋白活性、一致性和可重复性方面具有显著优势,能够满足科研、药物研发及产业化阶段对高质量重组蛋白的需求。
客户提供目的蛋白序列,以及稀有密码子、密码子偏好性等因素进行分析优化
提供蛋白序列分析报告以及正式的定制服务合同
对合成的基因进行测序验证,克隆表达载体中
质粒测序报告
转染HEK293/CHO细胞,分析SDS-PAGE
纯化蛋白样品以及表达评估报告(SDS-PAGE)
交付符合的需求的蛋白,QC撰写COA报告
纯化的蛋白及质量检验报告 (COA)
艾普蒂提供全面的哺乳动物细胞表达服务,包括生物信息学分析、蛋白质结构域选择、标签选择、构建体设计、序列验证、细胞转染、细胞扩增、试点表达、纯化、产量优化、放大处理及高级蛋白质分析。
哺乳动物细胞具备完整且高度精确的翻译后修饰体系,可实现天然型 N-linked / O-linked glycosylation、正确的二硫键形成(disulfide bond formation)及蛋白折叠。对于糖蛋白、分泌蛋白、受体蛋白和抗体相关蛋白,该体系可最大限度模拟体内真实状态,显著提升蛋白结构完整性和功能可靠性。
通过信号肽(signal peptide)筛选与优化,可实现目标蛋白高效分泌至培养上清,大幅降低细胞裂解步骤及宿主蛋白背景,使纯化流程更简洁、回收率更高,尤其适合抗体片段和可溶性受体蛋白。
在接近生理条件的细胞环境中表达,有利于蛋白的正确折叠、亚基组装及构象稳定。所获得蛋白在配体结合能力、信号转导活性和免疫反应相关功能方面,通常显著优于非哺乳系统表达产物。
在瞬时表达过程中,可精确调控转染密度、DNA/试剂比例、培养温度、培养基组成及收获时间点,实现对表达量与蛋白质量的双重优化,确保不同批次间具有良好的repeatability and consistency。
为什么选择哺乳动物细胞表达?
哺乳动物细胞表达的核心优势在于,它能够更真实地模拟人体或动物体内蛋白的天然合成环境,从而得到更接近“天然构象”的重组蛋白。对于很多复杂蛋白来说,正确折叠、正确二硫键形成以及糖基化等翻译后修饰非常关键,而这些往往是原核系统难以满足的。
因此,当客户的蛋白用于抗体筛选、受体结合、细胞功能实验、结构研究、药效评价、免疫学相关应用等场景时,哺乳表达通常是更稳妥的选择,尤其能显著提升蛋白的功能一致性和实验可重复性。
瞬时表达和稳定细胞株表达怎么选?
一般来说,瞬时表达更适合“快速交付”和“项目探索阶段”。它的优势是周期短、启动快,尤其当客户需要尽快拿到蛋白做验证、初步筛选或测试结合活性时非常合适。
而稳定细胞株表达更适合“长期供货”和“批次一致性要求高”的项目,比如后续需要持续产出大量蛋白、做多轮实验、甚至进入工艺放大的情况。稳定株的表达更稳定、重复性更好,也更便于长期维持相同的质量标准。
因此我们通常会根据客户的时间需求、用量需求、用途场景,推荐更匹配的策略,让项目在成本和周期上达到最优平衡。
表达量低怎么办?能优化吗?
哺乳动物表达中出现表达量偏低是很常见的情况,并不代表项目失败,大多数情况下都可以通过系统化优化显著改善。我们通常会先从表达构建策略检查,比如目标蛋白是否适合分泌表达、标签设计是否合理、信号肽是否匹配等。
在此基础上,我们也会进一步优化转染参数(如 DNA 用量、转染试剂比例、细胞密度、培养状态)、培养条件(温度、补料策略、培养周期)等。对于一些“难表达蛋白”,也可以通过改变细胞系、优化序列或调整表达形式(如 Fc 融合、截短构建)来提升产量。
总体来说,哺乳表达产量是可以优化的,我们会按用途需求把表达水平推进到“够用、稳定、可复现”的交付标准。
样品稳定性差,浓缩/冻融后容易沉淀怎么办?
很多客户在拿到蛋白后会进行浓缩、透析、更换缓冲液或反复冻融,这些过程都可能引发蛋白聚集沉淀,尤其是一些多结构域蛋白、受体蛋白或高疏水性蛋白更容易出现这种情况。
我们通常会在交付前就考虑蛋白的稳定性需求,通过缓冲体系筛选来降低聚集风险,例如优化 pH、盐浓度,适当加入保护剂(如甘油等),并建议客户采用分装保存,减少反复冻融对蛋白结构的影响。
对于高要求项目,我们也可以进行更系统的稳定性优化,使蛋白在运输、保存及下游操作过程中表现更稳定,从而提高客户实验成功率和复现性。
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