名称：
PATU8988S人胰腺癌细胞
一、培养基配制与准备
基础培养基
RPMI-1640 培养基（含 2mM L - 谷氨酰胺）
添加10% 胎牛血清（FBS）（建议使用进口优质血清）
添加1% 青霉素 - 链霉素双抗（100U/mL 青霉素，100μg/mL 链霉素）
培养条件
培养箱条件：37℃，5% CO₂，饱和湿度
传代比例：1:3 至 1:6（根据细胞生长速度调整）
换液频率：每 2-3 天更换一次培养基
二、细胞复苏操作
准备工作
预热培养基至 37℃
准备 15mL 离心管、移液枪、75cm² 培养瓶
紫外消毒生物安全柜 15 分钟
复苏步骤
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1. 从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴锅，轻轻摇晃至完全融化（约1分钟）
2. 用75%酒精消毒冻存管外壁，转移至生物安全柜
3. 将细胞悬液缓慢加入含5mL预热培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟
4. 弃上清，用5mL新鲜培养基重悬细胞沉淀
5. 将细胞悬液接种至75cm²培养瓶，补加培养基至10mL
6. 轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，放入培养箱培养
7. 24小时后首次换液，去除残留的DMSO和死细胞
三、细胞传代操作
传代时机
当细胞融合度达到 **80%-90%** 时进行传代
消化液配制
0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 溶液（不含酚红）
传代步骤
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1. 弃去旧培养基，用5mL PBS轻轻冲洗细胞两次，去除残留血清
2. 加入2mL胰蛋白酶-EDTA溶液，轻轻晃动培养瓶使消化液覆盖细胞层
3. 放入培养箱消化1-2分钟（显微镜下观察，细胞收缩变圆即可）
4. 加入3mL含血清的培养基终止消化，用移液管轻轻吹打瓶壁，确保细胞完全脱落
5. 将细胞悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟
6. 弃上清，用适量培养基重悬细胞，按1:3-1:6比例接种至新培养瓶
7. 补充培养基至适当体积，轻轻混匀后放回培养箱
四、细胞冻存操作
冻存液配制
90% FBS + 10% DMSO（现用现配，冰上预冷）
冻存步骤
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1. 取对数生长期的细胞，按传代步骤消化离心
2. 用预冷的冻存液重悬细胞，调整密度至1-5×10⁶ cells/mL
3. 将细胞悬液分装至冻存管，每管1mL
4. 采用梯度降温法：
- 4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存
（或使用程序降温盒直接放入-80℃冰箱）
售后服务
重发标准
(1）细胞运输问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养瓶严重漏液，冻存管内容物已融化；
(2）细胞污染问题，收到细胞7天内，发现细胞污染问题，经核实无误；
(3）细胞生长问题，收到细胞7天内，发现细胞不增殖，经核实无误。
不予重发
(1）收到细胞时间超过7天以上的；
(2）使用非我们推荐的细胞完培；
(3）细胞培养时经过其他处理导致细胞出现问题的；
(4）客户操作失误导致的细胞污染、细胞状态不好的；
(5）细胞冻存后再复苏的细胞；
(6）未能提供真实清晰细胞培养前3天的细胞状态照片。
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