产品名称：SNU-387人肝癌细胞
细胞复苏操作
前期准备工作
将完全培养基、PBS 缓冲液提前 30 分钟放入 37℃水浴锅预热，让试剂温度与细胞培养环境一致，减少温度刺激对细胞的损伤。
备好 15mL 离心管、T25 或 T75 培养瓶（依复苏细胞量选择，量少选 T25，量多或后续需大量培养选 T75）、移液枪及无菌枪头。
开启生物安全柜，用 75% 酒精擦拭操作台，再紫外消毒 20 分钟，营造无菌操作环境，防止微生物污染细胞。
复苏关键步骤
从液氮罐迅速取出冻存管，快速放入 37℃水浴，持续轻晃，确保 1 - 2 分钟内细胞悬液完全融化，避免冰晶残留损伤细胞。
用 75% 酒精消毒冻存管外壁后，移入生物安全柜。将细胞悬液缓慢注入含 5mL 预热培养基的离心管，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清，去除冻存液中的 DMSO，因其对细胞有毒性。
用 2mL 完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，接种至 T25 培养瓶，补加培养基至 5mL，轻轻摇匀，使细胞均匀分布，水平放置于培养箱，24 小时内勿移动，利于细胞贴壁。
复苏后观察要点
复苏 24 小时后，在显微镜下观察细胞状态。若细胞贴壁良好，呈上皮样形态，胞质饱满，说明复苏成功，此时更换新鲜培养基，去除死细胞及残留杂质。
若贴壁率低于 50%，可延长至 48 小时换液，期间减少对培养瓶的移动和观察，给细胞提供稳定贴壁环境。
把握传代时机
当 SNU-387 细胞融合度达 70% - 80% 时，需及时传代。细胞过度融合会引发接触抑制，阻碍细胞增殖，一般每 2 - 3 天需关注细胞融合度，判断是否达传代标准。
详细传代步骤
弃去培养瓶旧培养基，用 3mL PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞 2 次，彻底去除残留血清，因血清成分会抑制胰酶活性，影响细胞消化。
向培养瓶加 1mL 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 溶液，轻轻晃动使胰酶均匀覆盖细胞层，放入 37℃培养箱消化，消化时间通常 3 - 4 分钟。但因不同品牌胰酶活性有别，实际操作时需在显微镜下密切观察，当细胞边缘收缩、间隙增大、部分细胞呈圆形悬浮且有部分自然滑落时，立即加入 2mL 完全培养基终止消化。
用移液枪反复轻柔吹打瓶壁，将细胞吹打成单细胞悬液，动作要轻，避免产生大量气泡损伤细胞。将细胞悬液收集至离心管，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清。
按 1:2 - 1:4 的比例（可据细胞实际增殖速度调整，增殖快选较大比例，增殖慢选较小比例），用新鲜培养基重悬细胞，接种至新培养瓶（如 T75 培养瓶，添加 10 - 15mL 培养基）。接种后轻轻摇匀，放回培养箱继续培养，并准确记录传代日期和代数。建议传代不超 40 代，防止细胞特性漂移，影响实验结果准确性。
售后服务
重发标准
(1）细胞运输问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养瓶严重漏液，冻存管内容物已融化；
(2）细胞污染问题，收到细胞7天内，发现细胞污染问题，经核实无误；
(3）细胞生长问题，收到细胞7天内，发现细胞不增殖，经核实无误。
不予重发
(1）收到细胞时间超过7天以上的；
(2）使用非我们推荐的细胞完培；
(3）细胞培养时经过其他处理导致细胞出现问题的；
(4）客户操作失误导致的细胞污染、细胞状态不好的；
(5）细胞冻存后再复苏的细胞；
(6）未能提供真实清晰细胞培养前3天的细胞状态照片。
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