预热 RPMI-1640 完全培养基（含 10% FBS、1% 双抗）至 37℃。
准备 75cm² 培养瓶、15mL 离心管、移液枪及枪头，紫外照射超净台 30 分钟。
从液氮罐取出冻存管，37℃水浴快速解冻（约 1-2 分钟）。
75% 酒精消毒冻存管外壁，转移至超净台，将细胞悬液加入含 9mL 预热培养基的离心管。
1000rpm 离心 5 分钟，弃上清，用 5mL 培养基重悬细胞，接种至 75cm² 培养瓶，补加培养基至 10mL。
37℃、5% CO₂培养箱培养 24 小时后更换培养基，去除残留 DMSO。
观察细胞贴壁情况，正常形态为多边形或短梭形，贴壁生长。
细胞融合度达 70%-80% 时进行传代，通常每 2-3 天传代一次。
吸弃旧培养基，PBS 冲洗 2 次。
加入 1mL 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA，37℃消化 1-2 分钟（镜下观察细胞收缩变圆）。
加 2mL 完全培养基终止消化，轻柔吹打至细胞脱落并分散。
转移至离心管，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清。
按 1:3-1:5 比例接种至新培养瓶，补加培养基至适当体积。
现配含 10% DMSO、90% FBS 的冻存液，冰上预冷。
消化并离心收集细胞，用冻存液重悬至密度 1×10⁶-1×10⁷ cells/mL。
分装至冻存管，每管 1mL，标记信息。
梯度降温：4℃ 30 分钟 → -20℃ 2 小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存。
推荐培养基：RPMI-1640（含 10% FBS、1% 青霉素 - 链霉素）。
培养环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度培养箱。
传代比例：1:3-1:5，传代间隔 2-3 天。
冻存条件：液氮（-196℃）长期保存。
上皮样细胞，贴壁生长，细胞呈多边形或短梭形，可见明显核仁。
倍增时间约 24-36 小时，贴壁能力较强，消化时需适度吹打。
避免细胞过度融合，否则易出现生长停滞或分化。
消化时间不宜过长（≤2 分钟），防止细胞损伤。
定期检测支原体污染，建议每月 1 次。
冻存细胞复苏后，前 2-3 代需密切观察细胞状态。
检查培养基是否过期或血清质量不佳，更换新鲜培养基。
确认培养箱温度、CO₂浓度是否达标。
增加胰酶浓度（如 0.25%→0.5%）或延长消化时间（≤3 分钟）。
37℃预热胰酶，提高消化效率。
售后服务
重发标准 | (1）细胞运输问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养瓶严重漏液，冻存管内容物已融化； |
不予重发 | (1）收到细胞时间超过7天以上的； |
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